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    Biozellen基質膠在細胞侵襲實驗的操作方法

    發布時間: 2022-03-22  點擊次數: 1139次

    細胞侵襲實驗準備程序

    A、試劑準備:

    1、C 緩沖溶液 (0.5 X) 制備 : 使用 37 ℃水浴回溫的無血清細胞培養液 (例如: 無血清 DMEM 等,用于稀釋 A 膠) 稀釋 C 緩沖溶液 (10 X) (貨號: B-P-00002-C)至 C 緩沖溶液 (0.5 X), 即體積稀釋 20 倍。使用前放置 37 度水浴槽。

    (例如:1 mL C 緩沖溶液 (10 X) + 19 ml 無血清 DMEM; 如未使用完畢,可保存于 4 ℃ 冰箱, 保存一周)

    2、A 膠 (1X) 制備 : 將 A 膠 (2X) (貨號: B-P-00002-A) 置于 37 ℃水浴槽回溫 10 分鐘,確認*溶解。再將 37 ℃水浴回溫的無血清細胞培養液取 0.5 mL,加至 37 ℃已溶解的 0.5 mL A 膠 (2X),配置成 1 mL 的 A 膠 (1X)。使用前置于 37 度,可降低 A 膠黏度。

    (單次使用,勿重復冷凍解凍 A 膠 (1X) )

    B、細胞侵襲實驗步驟

    1、準備適用 24 孔板的 Transwell 裝置(例如:康寧 Transwell insert, 8 μm PET membrane)。

    2、 37 ℃已回溫的 C 緩沖溶液 (0.5 X)將 A 膠 (1X) 原液體積稀釋 5-20 倍,建議一開始可選用 15 倍。

    (根據細胞種類做稀釋比例對比實驗,找出最為適合自己實驗體系的稀釋倍數,稀釋倍數越高,膠體越軟,越容易穿透)

    3、根據 Transwell 上室底部面積加入步驟 2 的 0.1 mL 稀釋后的 A 膠稀釋液到 Transwell 上室中。

    4、將步驟 4 在 4 ℃ 冰箱孵育 2-3 小時。

    5、 Transwell 上室中加入 0.1 mL 無血清的細胞懸液,使細胞最終濃度約 7.5 x 10^4 cells/well.。

    6、 Transwell 下室中加入 0.8 mL 含 10 %血清的細胞培養液做為 chemoattractant,吸引細胞進行遷移及分泌基質蛋白酶 (MMP) 侵襲。

    (對照組為 Transwell 下室中加入含 0.8ml 無血清的細胞培養液)。

    7、將細胞培養板在 37 ℃, 5 % CO2 培養箱孵育 24-48 小時。

    8、移除培養液,以 PBS 清洗 2 次。

    9、用棉簽輕輕擦掉上層未遷移的細胞。

    10、加入 1 ml 100 % 甲醇室溫固定 30 分鐘,再以 PBS 清洗 2 次。

    11、加入 1 ml 0.1 % 結晶紫染液 ( 0.1 % (g/ml) PBS 結晶紫) 室溫染色 20 分鐘,再以 PBS 清洗 2 次。

    12、 Transwell 移至載玻片上,在顯微鏡下隨機 6-9 個視野觀察計算遷移的細胞數。


     

    Biozellen植物源材料基質膠編輯

     

    貨號: B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10

    規格: 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

    保存條件:4℃保存、 保存兩年

    產品描述

    Biozellen®3D細胞培養基質膠套裝包含整套基質膠、膠體固定液、膠體溶解液,可應用到 3D 細胞培養與微環境應用等;本試劑盒操作便利且可調控基質膠硬度進行多種細胞培養測試等;膠體可快速被固定液分解, 請操作前詳細閱讀此使用指南。

    Biozellen®3D細胞培養基質膠套裝為植物來源,無動物源成分、不含酚紅)

     

     

    深圳市安培生物科技有限公司是美國Biozellen公司的中國代理商。Biozellen®3D細胞/類器官培養基質膠現貨供應,經驗證可*替代BD/康寧的基質膠,來源為植物源且氨基酸序列人源化,無人畜共患病的病原菌或毒素污染,提供完整售后服務和技術支持。

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    致力成為推動生命科學進步和值得信賴的合作者



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